Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Методы и материалы выделения

Материалы по биологии и химии / Выделение и изучение силикатных бактерий / Методы и материалы выделения

Страница 1

Выделение чистой культуры силикатных бактерий несложный, однако, достаточно длительный процесс.

При изучении физиолого-биохимических особенностей и цикла развития бактерий, а также для установления их видовой принадлежности необходимо работать с чистой культурой микроорганизмов. Чистой называют такую культуру, которая получена из одной клетки и содержит микроорганизмы одного вида (генетически и фенотипически однородна).

Выделение чистой культуры состоит из трех этапов:

· получение накопительной культуры,

· выделение чистой культуры,

· определение ее чистоты (микроскопированием).

Для получения накопительной культуры определенного вида бактерий используют элективные условия (определенный химический состав среды), обеспечивающие преимущественное развитие данных бактерий. Затем из мест обитания, в которых преобладают представители данной группы, делают посев на соответствующую элективную среду. При создании элективных условий необходимо знать физиологию или четко представлять те особенности, которыми должны обладать выделяемые микроорганизмы.

О развитии культуры определенного вида бактерий, судят по выявлению характерных признаков развития изучаемых микроорганизмов - появление слизи, т. д. Помимо визуального наблюдения культуру микроскопируют и устанавливают присутствие желаемых форм, или продуктов метаболизма, образование которых свойственно выделяемым микроорганизмам.

Далее для выделения чистой культуры делают высев на чашки Петри для получения отдельной колонии определенного вида бактерий. Одну каплю суспензии микроорганизма наносят и осторожно размазывают стерильным стеклянным шпателем по поверхности плотной среды, после чего этим же шпателем протирают поверхность последующих трех-четырех чашек. Чашки выдерживают в термостате в течение двух до семи суток, так как скорость роста различных микроорганизмов неодинакова. После посева чашки помещают в термостат крышками вниз, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки Петри при застывании агара, не помешала получить изолированные колонии.

Естественным местом обитания силикатных бактерий являются песчаные пляжи, почва, растения из которых их можно выделить путем высева болтушки на селективную среду. Для выделения использовались стандартные способы выделения и применялись селективные среды, с разными источниками силикатов.

Для выделения за основу использовалась среда Г. А. Зака:

МgSО4 • 7Н2О и NаС1 поО,15 г, МnSО4 и FеSО4 по 0,05 г, калииалюмосиликата и СаСО3 по 2,0 г, Са3(РО4)2 - 1,5 г, сахарозы или крахмала - 20 г, агара - 15 г, воды - 1000 мл.

Источник кремния калийалюмосиликат заменялся цеолитом.

В качестве источника для выделения силикатных бактерий был использован лишайник, взятый из местности Тохорюкта Хоринский район.

Для выделения силикатных бактерий готовится болтушка следующим образом: 1 г лишайника разводится в 100 мл воды, взбалтывается на качалке 20 мин, для экстракции микроорганизмов из образца лишайника, затем фильтруется через складчатый фильтр для удаления частиц лишайника. Далее кипятят в течение 30 мин на водяной бане, для удаления посторонней микрофлоры, так как целью выделения является род Bacillus. Затем охлаждают, и производится посев на стерильную среду в чашки Петри. На поверхность среды наносят 1 мл болтушки и стерильным шпателем Дригальского распределяют каплю по поверхности плотной среды в чашке Петри. И инкубируют при t=37 0С.

Препараты бактерий окрашивают фуксином, метиленовой синью. Проводится окраска по Граму, споры выявляют окраской по методу Трухильо. Также для определения подвижности готовится препарат «раздавленная капля».