Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Методы исследования

Материалы по биологии и химии / Почвенные микроорганизмы-антагонисты, активные в отношении фитопатогенных грибов р. Fusarium и р. Bipolaris / Методы исследования

Страница 1

Культивирование фитопатогенных грибов р. Fusarium и р. Bipolaris,а также выделение почвенных микроорганизмов проводили на среде Чапека следующего состава: сахароза - 30 г/л, NaNo3 - 2 г/л, K2HPO4 - 1 г/л, MgSO4 × 7 H2O - 0,5 г/л, KCl - 0,5 г/л, FeSO4 × 7 H2O - 0,01 г/л, агар - 20 г/л. [3, 33].

Первичный скрининг перспективных штаммов антагонистов проводили методом совместного культивирования (рисунок 2.9).

Рисунок 2.9 - Первичный скрининг перспективных штаммов микроорганизмов-антагонистов фитопатогенных грибов р. Bipolaris и р. Fusarium

Высев из почвенной суспензии осуществляли на поверхность агаризованной среды соответствующего состава, предварительно засеянной конидиями определенного штамма грибов р. Fusarium и р. Bipolaris. Рассев проводили микробиологическим шпателем последовательно в четыре чашки Петри. Культивирование проводили в термостате при температуре плюс 28°С в течение двух недель. В процессе культивирования отмечали бактериальные колонии, вокруг которых наблюдалась зона отсутствия роста гриба.

Проверку антагонистической активности выделенных изолятов проводили методом перпендикулярных штрихов (рисунок 2.10).

Выделение чистых культур проводили на среде исходного состава методом истощающего штриха.

Количественную оценку антибиотической активности проводили по прорастанию конидий грибов р. Fusarium и р. Bipolaris в культуральном фильтрате выделенных микроорганизмов-антагонистов.

Фотографирование чашек проводили методом прямого сканирования на сканере Genius ColorPage-HR6 V2 с разрешением 300 dpi.

Рисунок 2.10 - Проверка антагонистической активности выделенных микроорганизмов-антагонистов методом перпендикулярного штриха

Фотографирование микроорганизмов проводили с помощью микрофотонасадки на фотопленку Kodak-100, а также цифрового фотоаппарата с использованием объективов х40 и х90, с использованием фазового контраста.

Обработку фотоизображений проводили с использованием графических редакторов Microsoft Photo Editor 3.0.2.3 и Adobe Photoshop 7.0.

Математическую обработку результатов исследования проводили стандартными статистическими методами с использованием пакета анализа MS Excel, StatSoft Statistica 6.0, а также оригинального программного обеспечения, разработанного С.В. Хижняком.

3. Результаты исследования

В результате предварительного скрининга из исследуемых культур почвенных грибов для дальнейшего исследования были отобраны четыре изолята (А-1, А-1(1), А-2, А-5), проявившие антибиотическую активность в отношении фитопатогенных грибов как р. Fusarium так и р. Bipolaris.

Изучение влияния культурального фильтрата выделенных антагонистов на прорастание конидий грибов р. Fusarium (штамм Т2ес) (приложение А) показало, что метаболиты всех штаммов антагонистов ингибируют прорастание конидий данного штамма. Наибольший токсический эффект проявил антагонист А-2 и А-5, наименьший - антагонист А-1(1) и А-1 (рисунок 3.1, 3.2).

Рисунок 3.1 - Влияние культурального фильтрата антагонистов на прорастание конидий грибов р. Fusarium (штамм Т2ес)

Рисунок 3.2 - Влияние культурального фильтрата антагонистов на прорастание конидий грибов р. Fusarium (штамм Т2ес). (фото автора)

Дисперсионный анализ подтвердил достоверность ингибирующего влияния культурального фильтрата на всхожесть конидий грибов р. Fusarium (штамм Т2ес) на уровне значимости p<0,05.

Изучение влияния культурального фильтрата выделенных антагонистов на прорастание конидий грибов р. Fusarium (штамм TIG6) показало, что метаболиты всех штаммов антагонистов, также как у штамма Т2ес, ингибируют прорастание конидий у этого штамма (TIG6). Наибольший токсический эффект проявил антагонист А-2, наименьший - антагонист А-1(1) (рисунок 3.3).

Дисперсионный анализ подтвердил достоверность ингибирующего влияния культурального фильтрата на всхожесть конидий грибов р. Fusarium (штамм TIG6) на уровне значимости p<0,05.

Изучение влияния культурального фильтрата выделенных антагонистов на прорастание конидий грибов р. Fusarium (штамм Т13m) показало, что метаболиты всех штаммов антагонистов ингибируют прорастание конидий данного штамма. Наибольший токсический эффект проявил антагонисты А-5 и А-2, наименьшие - антагонисты А-1(1) и А-1 (рисунок 3.4).