Американские ученые из штата Мичиган полагают, что в качестве главной причины отравления вод Мирового океана ртутью являются бактерии.
Американским ученым удалось выяснить, как лягушкам удается продолжать жить даже после глубокой заморозки.
Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.
Для проведения ПЦР готовили необходимое количество реакционной смеси для анализа необходимого числа проб в пропорциях, представленных в таблице 1. Для устранения погрешности, вносимой дозаторами при смешивании микрообъемов, общую смесь готовили из расчета на одну пробу больше, чем необходимо.
Таблица 1 Состав реакционной смеси для проведения ПЦР
|
Количество проб |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
10XБуфер (мкл) |
2,5 |
5 |
7,5 |
10 |
12,5 |
|
dNTP(мкл) |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
|
F-праймер (GR-20)(мкл) |
0,5 |
1 |
1,5 |
2 |
2,5 |
|
Tag-pol(мкл) |
0,5 |
1 |
1,5 |
2 |
2,5 |
|
2d H2O(мкл) |
17 |
34 |
51 |
68 |
85 |
|
R-праймер (Fas-OF) (мкл) |
0,5 |
1 |
1,5 |
2 |
2,5 |
Смесь тщательно перемешивали на миксере «Rotamix RM-1» (ELMI, Латвия), кратко центрифугировали в микроцентрифуге «Eppendorf Centrifuge 5414» при 14 тыс. об/мин.
В маркированные пробирки объемом 0.5 мл вносили по 23 мкл полученной реакционной смеси и по 2 мкл ДНК, полученной в результате реакции обратной транскрипции. Компоненты перемешивали на миксере «Rotamix RM-1» (ELMI, Латвия), смесь кратко центрифугировали в микроцентрифуге «Eppendorf Centrifuge 5414» при 14 тыс. об/мин. Для предотвращения испарения жидкости реакционную смесь покрывали двумя каплями минерального масла. Реакционную смесь инкубировали в амплификаторе «Терцик» («ДНК-Технология», Россия) по программе Fas Hot Start.
Условия инкубации реакционной смеси в амплификаторе «Терцик»:
для однонуклеотидного полиморфизма Fas -670 (A/G):
ºС - 30с
65ºС - 30с 45 циклов
72ºС - 40с
для однонуклеотидного полиморфизма Fas -1377 (A/G):
ºС - 30с
67,5ºС - 40с 45 циклов
72ºС - 30с
Для выявления полиморфизмов были использованы праймеры, нуклеотидная последовательность которых показана в таблицах 2 и 3. Также указана первичная структура праймеров для амплификации промоторного участка гена Fas (таблица 4).
Таблица 2 Структура праймеров для амплификации промоторного участка гена Fas, содержащего олигонуклеотидный полиморфизм Fas-670A\G
|
Праймеры |
Нуклеотидная последовательность (5´-3´) |
|
Fas ОНП F (A) |
5'-ggTTAACTgTCCATTCCAgA-3' |
|
Fas ОНП F(G) alt |
5'-ggTTAACTgTCCATTCCAgg -3' |
|
Fas ОНП R |
5'-TggCATgCTCACTTCAggTg -3' |
Таблица 3 Структура праймеров для амплификации промоторного участка гена Fas, содержащего олигонуклеотидный полиморфизм Fas-1377A\G
|
ПраймерыНуклеотидная последовательность (5´-3´) | |
|
Fas ОНП 1377 F A) |
5'-TgTgTgCACAAggCTggCACA -3' |
|
Fas ОНП 1377 F(G) |
5'-TgTgTgCACAAggCTggCACg -3' |
|
Fas ОНП R |
5'-TCTgCACCTCACTCTgCAACCT -3' |
Смотрите также
Ботаническая характеристика рода бурачниковых
ВВЕДЕНИЕ
Семейство
БУРАЧНИКОВЫЕ (BORAGINACEAE) Бурачниковые объединяют около 115 родов и до 2500
видов. Они распространены на всех континентах земного шара, но наиболее широко
- в тр ...
Летучие мыши
...
История исследования атома
Введение
Существование закономерной связи между всеми химическими элементами, ярко
выраженное в периодической системе, наталкивает на мысль о том, что в основе
всех атомов лежит нечто ...