Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Механизм действия антисмысловых олигонуклеотидов

Материалы по биологии и химии / Подавление экспрессии гена EGFP в клетках с использованием конъюгатов олигонуклеотида с пиреном / Механизм действия антисмысловых олигонуклеотидов

При взаимодействии антисмыслового олигонуклеотида с мРНК происходят два события: стерическое блокирование и расщепление мРНК-мишени РНКазой H. Для одних олигонуклеотидов происходят оба события (РНКаза H-компетентные олигонуклеотиды), для других - только стерическое блокирование (РНКаза H-независимые). Эти два варианта основаны на различных клеточных механизмах. Наиболее широкий спектр молекулярных механизмов затрачивается при использовании второго варианта. Это достигается адресацией олигонуклеотидов к определённым регуляторным последовательностям, как в пре-мРНК, так и в мРНК. В случае пре-мРНК адресация ODN к граничной области между интроном и экзоном нарушает сплайсинг, что приводит либо к его остановке, либо к образованию мРНК, кодирующей нефункциональный белок (см. рис.1). Другим перспективным участком связывания ODN в пре-мРНК является 5’-концевой регион. Взаимодействие ODN с этим регионом приводит к блокированию кепирования [2,4,5].

При взаимодействии ODN с мРНК происходит нарушение её трансляции, а следовательно и синтеза белка за счёт блокирования движения рибосомы по мРНК или даже её сборки в зависимости от положения сайта связывания [4].

Рис.1. Различные механизмы действия антисмысловых олигонуклеотидов.

РНКаза H-компетентные ODN могут быть адресованы к любому участку пре-мРНК и мРНК, так как их действие основано на активации РНКазы H, субстратом которой является РНК в составе дуплексов РНК - ДНК. Однако многие химически модифицированные антисмысловые олигонуклеотиды неспособны включать этот механизм ввиду высокой стерической специфичности РНКазы H. Это связано с тем, что большинство модификаций приводит к изменению параметров спирали дуплекса ODN - РНК, и они перестают быть субстратами для РНКазы H.

Антисмысловые олигонуклеотиды второго поколения - модифицированные по 2’-положению остатка сахара, не являются субстратами РНКазы Н, поэтому нужно искать другие расщепляющие агенты (искусственные РНКазы). Ряд малых молекул (интеркаляторы, поликатионы) способны расщеплять РНК-мишень. Прикрепление к олигонуклеотидам реакционноспособных групп приводит к расщеплению желаемых участков РНК-мишени. Такие группы - это комплексы металлов, амины, олигопептиды и молекулярные конструкциями с группами активного центра нуклеаз (имидазольное кольцо, COO--, NH2-группы, гуанидин) [3-7].