Секрет долголетия ночницы.

Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.

Общие принципы идентификации продуцентов биомассы

Материалы по биологии и химии / Культивирование, выделение, очистка и идентификация продуцентов биомассы / Общие принципы идентификации продуцентов биомассы

Страница 2

Метод хроматографии. Для идентификации антибиотиков и их продуцентов применяют метод хроматографии, открытый выдающимся русским ученым М.С. Цветом еще в 1903 г. и теперь очень широко используемый в лабораторной практике. Метод особенно важен при идентификации антибиотиков на ранних стадиях исследования.

Иногда метод хроматографии необходимо дополнить данными методов электрофореза, которые помогают выяснить прежде всего ионный характер антибиотика.

Метод бумажной хроматографии антибиотиков состоит в следующем. На полоски хроматографической бумаги длиной 20-30 см и шириной 1 см наносят испытуемый антибиотик. Подсушенные на воздухе полоски с антибиотиком помещают затем в хромато-графический бак или цилиндр с соответствующим растворителем на 10-20 ч. Время выбирают в зависимости от скорости прохождения растворителя и от высоты используемого для хроматографии сосуда.

Для обнаружения антибиотиков на хроматограммах применяют биологические, химические и физические методы.

Наиболее распространенным методом обнаружения антибиотиков на хроматограммах является биоавтографический метод. При этом высушенные в вытяжном шкафу полоски бумаги накладывают на агаровую пластинку, предварительно засеянную культурой тест-организма, чувствительной к изучаемому антибиотику. Кюветы с полосками бумаги помещают в термостат на 18-20 ч при температуре, оптимальной для роста тест-организма. По зонам отсутствия роста тест-микроба, образующимся вокруг тех мест на хроматограмме, где находится пятно антибиотика, во-первых, судят об однородности антибиотика, во-вторых, сравнивают полученные хроматограммы с хроматограммами известных антибиотических веществ.

Химические методы обнаружения антибиотиков на хроматограммах основаны на реакциях, в результате которых образуются соединения, выявляемые по соответствующей окраске или обесцвечиванию реактива в месте расположения пятна антибиотика. Физические методы обнаружения антибиотиков включают способы, связанные:

а) с выявлением люминесценции антибиотического пятна при воздействии УФ-излучения;

б) с поглощением УФ-излучения

в) с определением радиоактивной метки антибиотика.

Для целей бумажной хроматографии антибиотиков с успехом используют и круговые хроматограммы.

Важное значение при оценке результатов хроматографии имеет положение пятен исследуемых веществ, характеризуемое коэффициентом Яр Коэффициент определяется отношением расстояния, которое проходит пятно изучаемого вещества от линии старта за определенное время, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя от линии старта. Воспроизводимость значений Rf зависит от постоянства следующих факторов: качества бумаги, температуры, степени чистоты растворителей, состава газов атмосферы, в которую помещена бумага, однотипности процедур и аппаратуры.

При использовании метода хроматографии на бумаге для идентификации антибиотиков было показано, что значение Лу зависит также от системы растворителей, степени очистки изучаемого антибиотика и состава культуральной жидкости.

Итак, если в результате идентификации выделенного микроорганизма установлено, что он является новым видом и антибиотическое вещество, образуемое им, не принадлежит к уже описанным соединениям, то и организм, и продуцент должны быть детально исследованы. С этой целью прежде всего изучают условия культивирования микроба, обеспечивающие максимальное образование продукта. При подборе сред необходимо иметь в виду, что чем сложнее среда, тем труднее выделять и очищать продукт, поэтому среда для культивирования должна быть по возможности простой по составу и обеспечивать максимальную выработку антибиотического вещества [6, 9, 16]